影響電泳分離效果的因素主要涵蓋以下幾方面:
1.電場強度:電場強度加大,帶電粒子遷移速度越快,但過高的電場強度可能引發(fā)發(fā)熱、產(chǎn)生對流等狀況,對分離效果造成不良影響。例如,在強電場中,小分子物質(zhì)可能遷移過快,導(dǎo)致分離不夠清晰。
2.緩沖液的pH值:它會影響粒子的帶電特性和電荷量。不同的蛋白質(zhì)等分子在不同pH 值下帶電狀態(tài)不同。比如,某些蛋白質(zhì)在特定pH值時帶電量增加,遷移速度改變,可能無法與其他物質(zhì)全部分離。
3.緩沖液的離子強度:離子強度低,電泳速度快,但緩沖能力不佳;離子強度高,電泳速度慢,不過緩沖能力良好。若離子強度不合適,可能使得電流不穩(wěn)定,從而影響分離。
4.溫度:溫度升高,分子運動加快,遷移速度提高,但也可能使緩沖液黏度降低,影響緩沖效果。例如,高溫也許使樣品變性,影響分離的準確性。
5.支持介質(zhì):像濾紙、凝膠等的孔徑大小和均勻程度等都會影響分子的遷移與分離效果。孔徑過小可能阻礙大分子的遷移,孔徑過大則分離效果差強不佳。
6.樣品的性質(zhì):包含樣品的濃度、分子大小、形狀以及電荷分布等。濃度過高可能導(dǎo)致條帶重疊,分子形狀不規(guī)則同樣會影響遷移速度。